Brenda Johnson es una ex detective de Atlanta que en la actualidad lidera un departamento especial de la policía de Los Angeles encargado de resolver los más complejos casos de asesinato. Desde siempre ha destacado por su habilidad para interrogar a los sospechosos, escarbando en sus secretos más íntimos y provocándoles hasta el límite para obtener una confesión. Para conseguirlo se apoya en sus propias imperfecciones y neurosis, que la ayudan a comprender mejor los mecanismos mentales de los sospechosos y descubrir sus puntos débiles.

El Laboratorio del CSI de la Policía de Miami afronta cada investigación desde el análisis forense de la escena del crimen, combinando el uso de métodos científicos con el trabajo policial. Integrado por un equipo altamente calificado dirigido por el Teniente Horatio Caine,(David Caruso) conocido como "H" o "con H de Honesty" como Supervisor del turno de día, tiene entre sus principales componentes a Calleigh Duquesne, una experta en balística, Eric Delko, investigador experto en el análisis de fibras, Ryan Wolfe, Natalia Boa Vista y Walter Simmons. Junto a ellos, también trabaja el detective de homicidios de la Policía, Frank Tripp. La serie refleja también la compleja situación de la ciudad de Miami, combinando los casos de investigación policial con los derivados de la presencia de diversas bandas de procedencia extranjera.